绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立
葛优，郑晶，蒲善秋，周宇，黄翠锐，杨光友，谢跃，何冉，徐璟，古小彬
摘要：本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因（PocMMP2）的虫体转录水平，及建立针对重组PocMMP2（rPocMMP2）蛋白抗体的间接ELISA检测方法（iELISA）。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平，采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件，建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示：PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达，且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体（P<0 .05）;rpocmmp2约72 ku,主要存在于包涵体中；rpocmmp2-ielisa临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积（auc）为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率（64/86）,高于病原学检出率（10.47%,9/86）。pocmmp2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程，且所建立的rpocmmp2-ielisa有良好的敏感性、特异性和较高的重复性，可用于兔痒螨病的血清抗体检测。
关键词：绵羊痒螨兔亚种;MMP2;转录水平;原核表达;间接ELISA
基金资助：四川省科技计划重点研发项目（2019YFN0155）； 四川农业大学学科双支计划（2021993259）
引用该论文：葛优,郑晶,蒲善秋,周宇,黄翠锐,杨光友,谢跃,何冉,徐璟,古小彬.绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立[J].畜牧兽医学报,2022,53(02):567
