绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立

点击数:2572022-06-02 11:03:20 

绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立

                葛优,郑晶,蒲善秋,周宇,黄翠锐,杨光友,谢跃,何冉,徐璟,古小彬


摘要:本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P<0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47%,9/86)。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测。 

关键词:绵羊痒螨兔亚种;MMP2;转录水平;原核表达;间接ELISA

基金资助:四川省科技计划重点研发项目(2019YFN0155); 四川农业大学学科双支计划(2021993259)

引用该论文:葛优,郑晶,蒲善秋,周宇,黄翠锐,杨光友,谢跃,何冉,徐璟,古小彬.绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立[J].畜牧兽医学报,2022,53(02):567