表达兔球虫保护性抗原的重组枯草芽胞杆菌的构建与免疫保护效果分析
肖洁 何维 熊常明 郝哥 许力文 古小彬 杨光友
四川农业大学动物医学院
摘要：兔球虫病是一种呈世界性分布的寄生性原虫病，给养兔业造成了巨大的经济损失。传统的化学药物防控方法导致了普遍存在的耐药性及药物残留等问题；枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）作为常用的益生菌之一，被广泛用于外源蛋白的表达，这种基于益生菌的口服疫苗接种策略发生副作用的风险较小，还可以减少抗球虫药物的使用，因此具有良好的发展前景。本研究以CotB为锚定蛋白构建整合质粒，通过同源重组实现Ei AMA1、Ei IMP1、Em GAM56和Em ROP17抗原在枯草杆菌芽胞表面的展示。并使用重组芽胞Ei IMP1和重组芽胞Ei AMA1单独或混合拌料免疫家兔，对其抗肠艾美耳球虫感染的免疫保护效果进行评估；使用重组芽胞Em GAM56和重组芽胞Em ROP17单独或混合拌料免疫家兔，对其抗大型艾美耳球虫感染的免疫保护效果进行评估。结果显示：重组芽胞r Ei AMA1单独拌料免疫家兔后，卵囊排出量和病变计分都显著降低（P<0.05），卵囊减少率达到59.91%。重组芽胞Em GAM56单独拌料免疫组效果相较重组芽胞Em ROP17单独和Em GAM56+Em ROP17混合拌料免疫组更好，卵囊排量显著降低（P<0.05），卵囊减少率达到68.54%。此外，重组芽胞免疫后实验兔血清特异性IgG和肠道特异性IgA都出现显著上升（P<0.05）。综上，构建的四种重组芽胞都可以刺激机体产生特异性的全身和局部体液免疫反应，重组芽胞r Ei AMA1和重组芽胞Em GAM56分别表现出较好的抗肠艾美耳球虫和抗大型艾美耳球虫感染的免疫保护效果，因此，枯草芽胞杆菌具有作为兔球虫病疫苗活载体的潜力。
关键词： 兔;肠艾美耳球虫;大型艾美耳球虫;枯草芽胞杆菌;基因工程疫苗;
基金资助： 四川省科技计划项目（2022ZHYZ0003）；
专辑： 农业科技;基础科学
专题： 生物学;畜牧与动物医学
分类号： S852.4
