肠艾美耳球虫重组微线蛋白2对家兔免疫保护效果评价
陈 浩 郝 哥 蒲家艳 肖 洁 熊常明 何 维 朱煜华 许力文 姜 庆 杨光友
1.四川农业大学动物医学院 2.雅安职业技术学院
摘 要:本研究旨在评价肠艾美耳球虫重组微线蛋白 2(rEiMIC2)对兔的免疫保护效果,为肠艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研究提供参考。在肠艾美耳球虫转录组数据中筛选出 EiMIC2 基因,进行克隆、原核表达和蛋白纯化,并采用免疫印迹检测重组蛋白的免疫反应性。将 35 日龄无球虫新西兰幼兔 32 只随机分为 4 组(未免疫未攻虫组、未免疫攻虫组、pET32a 载体组和 rEiMIC2 免疫组),每组 8 只,未攻虫组和攻虫组每只颈部皮下注射 1 mL 无菌 PBS,pET32a 载体组和 rEiMIC2 免疫组每只分别接种 100 μg pET32a 载体蛋白、rEiMIC2,首免后 2 周进行二免。二免 14 d 后,除去未免疫未攻虫组其余 3 组每只新西兰兔口服接种 5×104个肠艾美耳球虫孢子化卵囊;攻虫 14 d 后安乐死所有新西兰兔。重组蛋白免疫兔后通过观察临床症状、肠道病变、测定兔的相对增重率、卵囊减少率、ACI 值和料肉比以及检测血清中特异性 IgG、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ 综合评价 rEiMIC2 的免疫保护效果。结果显示,EiMIC2 基因 ORF 长度为 1 605 bp,编码的蛋白分子质量约为 57.68 Ku。免疫印迹显示 rEiMIC2 能够被阳性血清所识别,表明具有良好的免疫反应性。免疫保护试验显示:攻虫后各组幼兔陆续出现精神沉郁和腹泻的症状,未免疫攻虫组和 rEiMIC2 免疫组各有 1 只兔死亡;rEiMIC2 免疫组相对增重率为 73.97%,卵囊减少率为 69.89%,ACI 值为 136.97,料肉比为 3.98:1,与未免疫攻虫组差异显著(P<0.05);rEiMIC2 免疫组肠道病变与未免疫攻虫组相比较轻,血清中特异性 IgG 水平显著高于未免疫攻虫组(P<0.05)。综上,rEiMIC2 免疫兔后,能有效减少卵囊排出和增重损失,减轻肠道损伤,具有一定的保护效果。
关键词:肠艾美耳球虫;微线蛋白 2;兔;免疫保护
基金资助:四川省雅安市重点研发项目(23ZDYF0004)
引用:陈浩,郝哥,蒲家艳,等.肠艾美耳球虫重组微线蛋白2对家兔免疫保护效果评价[J/OL].畜牧兽医学报:1-14[2024-06-28].
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