斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价

斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价

郑若愚，任永军，肖洁，白鑫，蒲家艳，陈浩，杨光友

1.四川农业大学动物医学院 2.四川省畜牧科学研究院 3.动物遗传育种四川省重点实验室

摘要：旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果，为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平，并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化；然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外，其余各组实验兔经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊，攻虫后观察各组临床表现，每周定时采血、称重，感染21 d后剖检观察肝组织病理变化，并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现，Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录，且转录水平存在差异，在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状，而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示，免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低，虫体数量较少。综上，斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：兔;斯氏艾美耳球虫;三磷酸甘油醛脱氢酶;重组蛋白;免疫保护;

基金资助：国家重点研发计划(2017YFD0501200)；

引用：郑若愚,任永军,肖洁等.斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价[J].畜牧兽医学报,2023,54(06):2581-2595.